分光光度計的基本原理是：物質在光的照射下會產生對光吸收的效應，而且物質對光的吸收是具有選擇性的。各種不同物質都具有其各自的吸收光譜。因此不同波長的單色光通過溶液時其光的能量就會被不同程度的吸收，光能量被吸收的程度和物質的濃度有一定的比例關系，即符合比耳定律。
 

　　分光光度計采用一個可以產生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產生特定波長的光源，光線透過測試的樣品后，部分光線被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
 

　　分光光度計的檢驗小妙招：
 

　　1.波長準確度的檢驗：
 

　　分光光度計在使用過程中，由于機械振動、溫度變化、燈絲變形、燈座松動或更換燈泡等原因，經常會出現刻度盤上的讀數與實際通過溶液的波長不符合的現象，因而導致儀器靈明度降低，影響測定結果的精度，需要進行檢驗。
 

　　檢驗波長準確度簡單的方法是用干涉濾光片或鐠釹濾光片測量儀器的吸收峰值, 如果測出的值與濾光片標準值之差超出規(guī)程規(guī)定，則需要進行波長調節(jié)。
 

　　2.透射比正確度的檢驗：
 

　　用透射比標準值分別為10 %、20 %、30 %左右的光譜中性濾光片，可見光區(qū)分別在440、546、635nm波長處，以空氣為參比，分別測量各濾光片的透射比，紫外光區(qū)用重鉻酸鉀溶液分別在235、257、313、350nm波長處，以高氯酸溶液為參比，測量其透射比。
 

　　3.穩(wěn)定度的檢驗：
 

　　在零點不受光的條件下，用零點調節(jié)器將儀器調至零點，觀察3分鐘讀取透射比的變化，即為零點穩(wěn)定性。在儀器測量范圍兩端向中間靠10nm處，調節(jié)零點后，蓋上樣品室蓋(打開光門)，使光電管受光，調節(jié)透射比為95%(數顯儀器調至100%)察3分鐘讀取透射比的變化，為光電流穩(wěn)定性。
 

　　4.光的檢驗：
 

　　分光光度計棱鏡式儀器在420nm處，光柵式儀器在360nm處，紫外分光計在220nm處分別用符合規(guī)定的截止濾光片，以空氣為參比，測量其透射比值，即為儀器在相應波長下的雜散輻射率。
 

　　分光光度計的使用注意事項：
 

　　1.該儀器應放在干燥的房間內，使用時放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上，室內照明不宜太強。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。
 

　　2.使用本儀器前，使用者應該首先了解本儀器的結構和工作原理，以及各個操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前，應該對儀器的安全性能進行檢查，電源接線應牢固，通電也要良好，各個調節(jié)旋鈕的起始位置應該正確，然后再按通電源開關。
 

　　3.在儀器尚未接通電源時，電表指針必須于“0”刻線上，若不是這種情況，則可以用電表上的校正螺絲進行調節(jié)。